血栓疾病是心腦血管疾病發(fā)生的主要誘因,全世界每年因為血栓疾病死亡達(dá)數(shù)百萬人。納豆激酶(NK)是一類來自天然枯草桿菌的細(xì)菌性堿性絲氨酸蛋白酶,它具有較強(qiáng)的纖維蛋白溶解活性,可以直接斷裂交聯(lián)的纖維蛋白,催化血纖維蛋白酶原轉(zhuǎn)變?yōu)槔w溶酶或鈍化纖維蛋白溶解抑制劑,具有安全性好、價格便宜、容易提取和副作用小等優(yōu)點。然而,NK是一類蛋白質(zhì),在外界溫度和pH影響下容易失活,此外,它沒有靶向溶血栓的性能。因此,設(shè)計和制備NK的藥物傳輸載體不僅可以保護(hù)NK的酶活,而且可以賦予其靶向溶血栓的性能。聚谷氨酸肽類樹狀大分子具有可控的尺寸、優(yōu)異的水溶性、良好的生物降解性、良好的生物相容性和較低的細(xì)胞毒性等特點,另外,其表面具有大量的可功能化官能團(tuán),因此可以被用于保護(hù)和傳輸藥物的理想載體。

  基于以上考慮,本學(xué)位論文使用聚谷氨酸肽類樹狀大分子作為傳輸和保護(hù)納豆激酶的藥物載體,制備了一系列肽類樹狀大分子,考察了其負(fù)載納豆激酶前后的化學(xué)和生物性能。主要研究內(nèi)容及結(jié)果如下:1.制備了二代、三代和四代的聚谷氨酸肽類樹狀大分子(G_n,n=2、3、4),然后制備了聚乙二醇-不同代數(shù)聚谷氨酸肽類樹狀大分子(G_n-PEG-G_n,n=2、3、4)。我們對不同比例的G_n-PEG-G_n負(fù)載納豆激酶(NK)后進(jìn)行了酶活實驗,結(jié)果表明當(dāng)G_3-PEG-G_3/NK等于6/1時酶活最佳。Zeta-電位、TEM和DLS結(jié)果證明了G_3-PEG-G_3對NK的負(fù)載機(jī)理為靜電作用。MTT實驗結(jié)果表明G_3-PEG-G_3具有良好的細(xì)胞存活率和生物相容性。體外溶血栓研究結(jié)果表明G_3-PEG-G_3/NK(6/1)具有很好的溶血栓性能。2.制備了多臂端疊氮基聚乙二醇(x-PEG(N_3)_x,x=2、4、6、8),然后制備了不同臂數(shù)聚乙二醇-聚谷氨酸肽類樹狀大分子(x-PEG(G_3)_x,x=2、4、6、8)。對不同比例的x-PEG(G_3)_x負(fù)載納豆激酶(NK)后進(jìn)行了酶活實驗,其結(jié)果表明當(dāng)4-PEG(G_3)_4/NK等于4/1時酶活最佳。Zeta-電位、TEM和DLS證明4-PEG(G_3)_4對NK的負(fù)載機(jī)理為靜電作用。MTT實驗結(jié)果表明4-PEG(G_3)_4具有良好的細(xì)胞存活率和生物相容性。

  體外和體內(nèi)溶血栓研究結(jié)果表明4-PEG(G_3)_4/NK(1/1)具有很好的溶血栓性能。3.制備了端疊氮基多臂聚乳酸(x-PLA(N_3)_x,x=3、4、6),然后制備了多臂聚乳酸-聚谷氨酸肽類樹狀大分子(x-PLA(G_3)_x,x=3、4、6)。對不同比例x-PLA(G_3)_x負(fù)載納豆激酶(NK)后進(jìn)行了酶活實驗,其結(jié)果表明當(dāng)4-PLA(G_3)_4/NK等于1/1時酶活最佳。合成了Fe_3O_4-4-PLA(G_3)_4-RGD納米載體,TEM和LSCM證明了Fe_3O_4-4-PLA(G_3)_4-RGD的成功制備,VSM證明了Fe_3O_4-4-PLA(G_3)_4-RGD具有很好的磁性性能。MTT實驗證明了Fe_3O_4-4-PLA(G_3)_4-RGD納米載體具有良好的細(xì)胞存活率和生物相容性。體外和體內(nèi)溶血栓實驗證明了Fe_3O_4-4-PLA(G_3)_4-RGD/NK(1/1)具有雙重的靶向溶血栓性能。4.制備了二氧化硅-聚谷氨酸肽類樹狀大分子(M-MSNs-G_3-RGD),FTIR、TGA、TEM和LSCM證明了M-MSNs-G_3-RGD的成功合成,VSM證明了M-MSNs-G_3-RGD具有很好的磁性性能。對不同比例M-MSNs-G_3-RGD負(fù)載NK后進(jìn)行了酶活測試,實驗結(jié)果表明最佳的載藥比為4/1。MTT實驗證明了M-MSNs-G_3-RGD納米載體具有良好的細(xì)胞存活率和生物相容性。通過體外和體內(nèi)溶血栓實驗證明了M-MSNs-G_3-RGD/NK(4/1)具有雙重的靶向溶血栓性能。